敢死队2010的故事发生在抗日战争初期。国军中校马烽（宋佳伦 饰）奉命组建“025敢死队”，准备寻找机会袭击南京城内的日军。为此，他从即将被处决的死囚中挑选出五名自认为合适的队员，分别是苏维埃政府军械部长麻老五（韩童生 饰）、中情局特工徐飞虎（杨猛 饰）、飞贼唐人杰（郭铁城 饰），以及强大龙（铁鹤 饰）和朱大山。
经过周密部署，马烽率领队员潜入日寇铁蹄下的南京城，不仅成功救出两名前来援华的美国医生，还保护了他们拍摄的南京大屠杀胶片。随后，敢死队冒死刺杀了日军驻南京最高指挥官熊本连太郎，并夺回国宝传国玉玺。为了替惨遭杀害的三十万同胞复仇，他们最终决定在日军高官举行会议时与敌人同归于尽。
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