《惊声尖笑2》中，经历了高中万圣节的杀人惨案后，辛蒂（Anna Faris饰）和朋友们步入大学校园。轻松自在的大学生活逐渐冲淡了他们对那段恐怖经历的记忆。
热衷超自然现象研究的奥德曼教授（Tim Curry饰）决定前往一年前曾发生过恐怖事件的鬼屋进行实验，并寻找拥有濒死体验的人作为与灵异沟通的媒介。得知辛蒂等人的经历后，他的助手歪头（David Cross饰）以优等成绩为诱饵，将他们召集起来参加一项有关失眠的课题研究。
众人原本抱着玩乐的心态，跟随奥德曼教授和歪头来到阴森诡异的鬼屋，却在那里度过了极其难忘而恐怖的一夜。
