光绪皇夜祭珍妃以清末宫廷风云为背景，讲述光绪帝选后前夕，属意于将军长叙的次女珍儿。此时清廷刚在与日本的战争中失利，朝廷军费却被大权在握的慈禧太后挪作修建颐和园之用，光绪对此深感愤懑，并一直谋求变法图强。
大选当天，在权臣荣禄和宠监李连英的协助下，慈禧暗中操纵选后结果，将自己的侄女立为皇后，珍儿只能屈居妃位。珍妃入宫后深得光绪宠爱，也因此遭到皇后的嫉恨。一次，皇后请珍妃替她荐人，珍妃出言冷淡，皇后便前往慈禧面前进谗，导致珍妃当众受辱。
光绪不甘继续充当傀儡，在珍妃鼓励下连夜密召直隶按察使袁世凯，计划诛除荣禄，再迫使慈禧交出政权。不料袁世凯倒戈告密，慈禧随即发动政变，将光绪幽禁于瀛台，并把珍妃贬往北三所。身处冷宫的珍妃孤寂凄凉，光绪只得假扮太监前去与她私会，两人此时得知八国联军已逼近京师。
慈禧仓皇出逃前召见珍妃，希望她劝光绪一同离开。珍妃却以大义相责，坚决劝光绪留在京城，慈禧震怒之下命人将她投入井中。光绪悲痛欲绝，待返京之后，在井边彻夜祭奠珍妃，回忆过往，泪流不止。
本片由大凤凰影片公司出品、自由片场摄制，李少芸担任监制并与陈云共同编剧，刘芳执导，李少芸原著，谭伯叶制片。影片是李少芸针对新
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