巾帼枭雄之谍血长天粤语的故事背景设定在20世纪三十年代的中国。日军侵略之下，山河破碎，百姓饱受战火摧残。张寄生（胡杏儿 饰）原本只是一个平凡女子，刚与丈夫周细鸡（萧正楠 饰）成婚，正憧憬着幸福安稳的生活，却亲眼目睹亲人和爱人惨死于敌人手中。她虽侥幸活了下来，却又遭受屈辱，人生顿时失去所有希望，甚至萌生了自尽的念头。危急之际，她被游击队队长江尚红（黎耀祥 饰）救下。
在动荡不安的岁月里，张寄生与江尚红逐渐建立起真挚的感情。然而，张寄生始终无法放下深重的血海深仇，而江尚红也背负着一段不堪回首的黑暗往事，这段感情因此承受着沉重的考验。在江尚红的推荐下，张寄生加入共产党，化身粤剧花旦水芙蓉，潜入敌方内部搜集情报，并屡次为抗战立下战功。
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